南方农村报记者 李萧佳

　　同样是做精准剔除，为何有的猪场做得很好，有的却不成功，甚至整个猪场都剔没了？华中农业大学教授赵俊龙认为，非瘟精准剔除成功的关键是诊断及时与准确。
剔除依靠诊断、执行力和环境
　　防控非洲猪瘟，做好精准剔除十分重要。赵俊龙表示，影响精准剔除的最关键因素是正确及时的诊断，其次是执行力和周边环境条件，此外还包括其他生物安全措施。其中，诊断与检测包括临床诊断、病理学诊断、鉴别诊断和实验室检测技术。
　　赵俊龙介绍，可以从猪只的临床表现判断是非洲猪瘟急性型、亚急性型或慢性型。非洲猪瘟急性型的猪只体温40-42°C，死亡率90%-100%，呈现厌食、不愿活动。皮肤发红、呕吐、鼻腔出血、血便、便秘等。妊娠母猪流产；非洲猪瘟亚急性型的猪只出现中度发热，食欲下降。皮肤出血和水肿，感染后7-20天死亡，病死率为30%-70%；而非洲猪瘟慢性型猪只则表现为病猪体重下降、生长不良，呈现间歇热，耳部、腹部和大腿内侧皮肤发生坏死或溃疡，关节肿大，感染猪可出现呼吸道症状等。
　　病理学剖检可看到网状内皮系统被损害。赵俊龙强调，科研机构可以做这方面的工作，不建议猪场私自做病理学诊断。
病原学检测时注意采样部位
　　赵俊龙介绍，实验室检测方法有很多，如病原学检测方法有病毒分离鉴定；普通和荧光定量PCR；非洲猪瘟病毒的分离；HAD(血凝实验)；LAMP(等温扩增)；胶体金；FAT(免疫荧光抗体)；夹心法ELISA检测抗原等。
　　病原学检测应该采哪些部位比较好呢？赵俊龙介绍，非洲猪瘟攻毒猪病毒检测的敏感性依次为：血液<口腔拭子<肛门拭子。接触感染猪病毒检测的敏感性：口腔拭子<血液≈肛门拭子。组织病毒含量：脾<肝<淋巴结<心脏≈结肠；攻毒猪<阴性接触猪。生存时间：攻毒感染猪6-9天；阴性接触猪13-14天左右。
　　赵俊龙总结，病原学检测可以用普通PCR和荧光定量PCR的方法，血清学方法中推荐使用ELISA抗体检测。IB(免疫印迹法)，IFA(免疫荧光抗体)和IPT(间接免疫过氧化物酶检验)是非洲猪瘟病毒确诊的金标准。可以用血清学方法检测耐过猪。
　　对于荧光定量PCR与抗体检测分析，赵俊龙介绍，急性感染猪的CT值一般在20以下，猪只快速死亡，症状明显，抗体滴度低，无抗体。亚急性感染的CT值在20-25左右，存活时间一个月左右，临床评分波动上升，在约10-14天后抗体出现，滴度逐步升高；慢性感染的CT始终在30-40间，波动下降，最后为阴性；34-38天后临床症状消失，表现健康；抗体滴度始终维持在高位。
试剂盒与采样方法影响结果
　　影响分子生物学检测结果的因素有很多，赵俊龙表示，一是商品化试剂盒或自配体系的质量(引物、酶、反应体系)。体系与特异性、敏感性、操作性、稳定性、质量控制相关。
　　二是采样方法、采样部位、采样时机和样品的保存运输与处理。发现可疑症状，第一时间采样送检(采样优先顺序：鼻腔拭子<唾液<阴门拭子<肛门拭子)。
　　血液采集要用不含抗凝剂的采血管或者含EDTA的抗凝剂采血管或者使用棉签采集血液，操作简便，应激小；随后4度以下保存或者加冰邮寄。
　　环境采集以区块为单位，对风险等级进行区域采样。建议不要安排消毒人员自己采样。生产区内采集，包括墙体、地面、风机、地沟、设备、水线、料线等。其他死角、料槽底部等不易采集到的位置都需要注意。生产区外包括出猪台、场区大门、料塔、下水道、员工宿舍、储物间、浴室、办公室、餐厅厨房、车辆、水源等所有可能受到污染的区域。赵俊龙介绍，样品在4℃保存。采样材料用棉签或纱布，更推荐使用棉签。
　　三是核酸提取有机溶剂、柱提法、磁珠法，但现在大多数实验室都用后两者；四是人员操作的规范性、科学性和熟练度；
　　五是实验室管理，尤其是对交叉污染的预防和处理。以及与人员、流程、风向有关；六是仪器设备的质量，荧光PCR仪和试剂盒的匹配性。
　　检测技术应用十分广泛，赵俊龙介绍，在精准剔除方面，除了诊断准确以外，更重要的是确定范围，这完全取决于猪场现场实际情况。对于病毒猪，建议在原位处死后，用密封塑料袋封装再运走，然后对周边环境进行火焰消毒，再用消毒液进行消毒。他强调，在操作过程中要保护好个人，穿戴防护服。
　　检测技术还可用于复产环境的检测。赵俊龙表示，料槽，栏杆，粪沟，漏粪板，风机水帘，饮水器，门窗，料线的阳性污染可能性较大。生活区环境中，员工宿舍，门卫室，生活区仓库是重点防控区。
　　此外，检测技术应用于耐过猪的筛选与监测；蚊虫、苍蝇、软蜱、鸟、蚂蟥等传播媒介的检测和饲料和饲料原料的检测。
　　准确诊断是剔除的基础，从临床可判断是急性、亚急性还是慢性型。